核桃楸皮甲醇提取物的急性毒理研究-醫(yī)學論文
核桃楸皮(Cortex Juglandis Mandshuricae)為胡桃科核桃屬植物核桃楸(Juglans mandshurica Maxim.)的樹皮[1]。原植物核桃楸又名山核桃、胡桃、胡桃楸、小核桃等,為胡桃科胡桃屬落葉喬木,主要分布于我國東北地區(qū)(小興安嶺及張廣才嶺),河北、北京、內(nèi)蒙古、山西等地有少量分布,俄羅斯遠東地區(qū)、朝鮮、日本也有分布[2],其樹皮及未成熟果實或果皮可用藥,樹皮又名楸樹皮,味苦性寒,具有清熱解毒、止痢明目的功效,主治泄瀉、痢疾、白帶、目赤[3]?,F(xiàn)代研究表明,核桃楸具有抗氧化[4]、抗菌、消炎、抗癌等作用[5]。近幾年核桃楸皮化學成分的分離提取和抗癌作用機制研究成為熱點,經(jīng)過現(xiàn)代對胡桃楸化學成分分析證明胡桃楸含有萘醌、胡桃醌、黃銅苷、鞣花酸及沒食子酸等化學物質(zhì)[6]?,F(xiàn)為觀察其甲醇提取液的毒性及安全性,進行急性毒性的實驗研究。直接用SPSS軟件計算LD50,具有簡單、快速、直觀和方便的特點[7]。
1 儀器與試藥
核桃楸皮(核桃揪皮采自黑龍江省牡丹江市牡丹峰);灌胃器、燒杯、量筒、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子天平等。
昆明種小鼠(牡丹江醫(yī)學院實驗動物中心提供),體重18~22 g,雌雄各半。實驗前動物置于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周,室溫20~28℃,采用架式籠養(yǎng),標準飼料,飲水為自來水。
2 方法與結(jié)果
2.1 中藥提取液的制備
核桃楸皮粉碎后,用索氏提取器乙醚回流至無色,再經(jīng)甲醇提取48 h至無色,蒸干甲醇、轉(zhuǎn)水溶解、過濾、濃縮,形成最大濃度的混懸液0.181 1 mg/ml(以不堵塞灌胃器為限度),放入冰箱保存?zhèn)溆谩?
2.2 預(yù)實驗
實驗前動物禁食不禁水12 h。隨機將昆明種小鼠分為5組,每組4只。①0.10 mL/10 g藥液,每日1次。②0.15 mL/10 g藥液,每日1次。③0.20 mL/10 g藥液,每日1次。④0.15 mL/10 g藥液,每日2次,每次灌胃間隔8 h。⑤0.20 mL/10 g藥液,每日2次,每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d,每2天稱一次體重,記錄死亡情況。結(jié)果:①無死亡,體態(tài)正常;②無死亡;③死亡1只;④、⑤全部死亡。將存活小鼠處死,解剖觀察內(nèi)臟器官,心、肝、脾、胃、腎未見異常。
2.3 急性毒性實驗
選用昆明種小鼠40只,雌、雄各半,體重18~22 g,分為4組,每組10只,實驗前動物禁食不禁水12 h。①0.1 mL/10 g藥液,每日1次。②0.1 mL/10 g藥液,每日2次,每次灌胃間隔8 h。③0.1 mL/10 g藥液,每日3次,每次灌胃間隔8 h。④0.1 mL/10 g蒸餾水,每日3次,每次灌胃間隔8 h。連續(xù)觀察7 d,每2天稱一次體重,記錄死亡情況。結(jié)果:①無死亡;②死亡5只;③全部死亡。將①、④存活小鼠摘眼取血,測血液指標備用,處死,解剖觀察內(nèi)臟器官,心、肝、脾、胃、腎未見異常。
2.4 結(jié)果分析
2.4.1 軟件SPSS 13.0計算LD50 輸入表1數(shù)據(jù)的過程如下:運行SPSS 13.0 for Windows,進入SPSS數(shù)據(jù)編輯器后,首先激活變量表(VariableView)定義變量,在變量名(name)下輸入“劑量”、“動物數(shù)”和“死亡數(shù)”,并將“劑量”的小數(shù)點位數(shù)(Decimal)設(shè)為“2”,“動物數(shù)”和“死亡數(shù)”的小數(shù)點位數(shù)設(shè)為“0”。然后進入數(shù)據(jù)表(Data View),根據(jù)表頭提示,依次輸入各組數(shù)據(jù)。在數(shù)據(jù)表主菜單中,選擇Analyze——Regression——Probit,調(diào)出Probit Analyze對話框,只需將“劑量”選入“Covariates”欄中,“死亡數(shù)”選入“Response frequency”欄中,“動物總數(shù)”選入“Total observed”欄中,在“Transform”欄中,選擇“l(fā)og base 10”(以10為底的對數(shù)轉(zhuǎn)換),其他保持默認選項。然后單擊“OK”鈕即完成整個操作過程。測定結(jié)果LD50為2.622 mg/kg,其95%可信范圍為1.811 mg/kg ≤ LD50 ≤ 5.433 mg/kg。
2.4.2 血液分析 各組數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 for Windows,LSD-t方差分析,結(jié)果顯示,①、④各項血液指標數(shù)據(jù)差異均無統(tǒng)計學意義(均P > 0.05)。
3 討論
有文獻報道,胡桃醌小鼠灌胃給藥的LD50為2.5 mg/kg,腹腔注射的LD50為25 mg/kg,大鼠灌胃給藥的LD50為112 mg/kg[8]。胡桃醌溶于乙醚,經(jīng)過乙醚回流后的核桃楸皮甲醇提取液仍然有很大毒性,說明還含有其他脂溶性毒性物質(zhì)。
核桃楸皮甲醇提取液富集了極性比較大的脂溶性成分,其LD50為臨床科學、安全用藥提供了一定依據(jù)。SPSS統(tǒng)計軟件具有數(shù)據(jù)整理、分析和統(tǒng)計和結(jié)果輸出等多種功能,將其用于LD50的計算,直接在視窗系統(tǒng)中輸入數(shù)據(jù),不需查表和編程,步驟簡單,不易出錯。
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